土壤蔗糖酶( S-SC）活性檢測試劑盒說明書

可見分光光度法

注意：本產品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。

貨號：BC0240

規(guī)格：50T/24S  土壤蔗糖酶檢測試劑盒 可見分光光度法  土壤蔗糖酶檢測試劑盒 可見分光光度法

產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1、 試劑一：自備甲苯；

2、 試劑三：臨用前取1瓶加入15 mL蒸餾水充分溶解備用，用不完的試劑2-8℃保存2周；

3、 標準品：臨用前加入1 mL蒸餾水溶解備用，2-8℃可保存2周，或者用飽和苯甲酸溶液溶解，可保存更長時間。

產品簡介：

S-SC能夠水解蔗糖變成相應的單糖而被機體吸收，其酶促作用產物與土壤中有機質、氮、磷含量，微生物數(shù)量及土壤呼吸強度密切關，是評價土壤肥力的重要指標。

S-SC催化蔗糖降解產生還原糖，進一步與3,5－二硝基水楊酸反應，生成棕紅色氨基化合物，在540nm有特征光吸收，在一定范圍內540nm光吸收增加速率與S-SC活性成正比。

Sucrose              Reducing Sugare             3-Amino-5-Nitrosalicylic Acid (540nm)

注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、30-50目篩、冰、研缽、甲苯（不允許快遞）和蒸餾水。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）

新鮮土樣自然風干或37度烘箱風干，研磨，過30-50目篩。

二、測定步驟

1. 分光光度計預熱30min以上，調節(jié)波長至540nm，蒸餾水調零。

2. 標準品準備：將標準品用蒸餾水稀釋至0.5、0.4、0.3、0.2、0.1 mg/mL，可參考下表。

備注：實驗中每個標準管需200µL標準溶液。

3. 加樣表：

充分混勻，放入沸水浴中煮沸5min（蓋緊，纏封口膜以防止水分散失），流水冷卻后充分混勻。

540nm處蒸餾水調零，取全部反應液于1mL玻璃比色皿中，讀取吸光值A，分別記為A測定管、A對照管、A標準管、A空白管。計算ΔA測定=A測定管-A對照管（每個測定管需設一個對照管），ΔA標準=A標準管-A空白管。標準曲線和空白管只需測1-2次。

三、S-SC活性計算

1、標準曲線的建立：

根據標準管的濃度（x，mg/mL）和吸光度ΔA標準（y，ΔA標準），建立標準曲線。根據標準曲線，將ΔA測定（y，ΔA測定）帶入公式計算樣本濃度（x，mg/mL）。

2、S-SC活性計算：

單位的定義：37℃，每天每g土樣中產生1mg還原糖定義為一個S-SC活力單位。

S-SC活力(U/g 土樣)= x ×10×V反總÷W÷T=101.5x

10：稀釋倍數(shù)；T：反應時間，1d；V反總：反應體系總體積，1.015mL；W：樣本質量，0.1g。

相關發(fā)表文獻：

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參考文獻：

[1] Gao M, Song W, Zhou Q, et al. Interactive effect of oxytetracycline and lead on soil enzymatic activity and microbial biomass[J]. Environmental toxicology and pharmacology, 2013, 36(2): 667-674.

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