多聚半乳糖醛酸酶（PG）活性檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
貨號：BC2660
規(guī)格：50T/24S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑一：若溶液中有晶體析出，37℃水浴溶解；

2. 試劑二：臨用前加入8 mL蒸餾水，60℃水浴助溶；

3. 標(biāo)準(zhǔn)品：10mg半乳糖醛酸。臨用前加入0.943 mL蒸餾水，配成50 μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)液。

產(chǎn)品說明：

多聚半乳糖醛酸酶（Ploygalacturonase，PG）屬果膠酶的一種，廣泛存在于植物、細(xì)菌及真菌中。其催化多聚半乳糖醛酸分解，在果實軟化、花粉授粉、種子發(fā)育成熟及器官脫落等方面具有重要作用，并且病原菌在侵染宿主植物時，可分泌多聚半乳糖醛酸酶來降解宿主細(xì)胞壁，進而導(dǎo)致病程發(fā)展。

PG水解多聚半乳糖醛酸生成半乳糖醛酸，半乳糖醛酸與DNS試劑反應(yīng)生成在540 nm有特征吸收峰的棕紅色物質(zhì)，測定540 nm處吸光值變化可計算得果膠酶活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、低溫臺式離心機、水浴鍋、1 mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
注意事項：

1. 樣本提取上清液置于冰上待測，且樣本提取完成后建議當(dāng)天提取當(dāng)天內(nèi)測完。

2. 當(dāng)A大于1.2時，建議將樣本用提取液稀釋后再進行測定，并在計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

3. 植物果實組織建議將樣本稀釋10倍或20倍后再測定。

4. 若樣本ΔA值偏小，建議延長酶促反應(yīng)時間，并在計算公式中除以相應(yīng)時間。

實驗實例：

1. 取0.1g鮮梨加入1mL提取液冰浴勻漿后于4℃，16000 g，離心10 min，取上清稀釋5倍后按照測定步驟操作，測得計算ΔA=A測定管-A對照管=0.912-0.882=0.03，帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.1127x-0.1207，計算得x=1.337，按樣本質(zhì)量計算：

PG酶活（U/g質(zhì)量）= 0.5x÷W×5（稀釋倍數(shù)）=33.43 U/g質(zhì)量。
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