堿性蛋白酶（AKP）活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法
貨號(hào)：BC2305
規(guī)格：100T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑一：臨用前加入4mL蒸餾水，充分溶解；2-8℃保存8周。

2. 試劑二：臨用前取1瓶加入4mL提取液，沸水浴中攪拌溶解；2-8℃保存8周。

3. 標(biāo)準(zhǔn)品：20μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)酪/酸。

產(chǎn)品說(shuō)明：
AKP是指在堿性條件下催化蛋白質(zhì)肽鍵水解的酶類(lèi)，屬于絲*酸蛋白酶。此外，該酶還能夠水解酯鍵、酰胺鍵，具有轉(zhuǎn)酯及轉(zhuǎn)肽的功能。該酶是主要工業(yè)用酶之一，廣泛應(yīng)用于制藥、絲綢、食品、制革等行業(yè)。
在堿性條件下，AKP水解酪蛋白生成酪/酸；在堿性條件下，酪/酸還原磷鉬酸生成鎢藍(lán)；鎢藍(lán)在680nm有特征吸收峰，測(cè)定680nm吸光度增加速率，來(lái)計(jì)算AKP活性。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
研缽/勻漿器、臺(tái)式離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、水浴鍋、磁力攪拌器、可調(diào)式移液槍、1.5 mL EP管和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見(jiàn)“產(chǎn)品資料"附件
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
稱(chēng)約0.1g組織，加入1mL提取液，冰上充分研磨，10000rpm 4℃離心10min，取上清，即粗酶液，置冰上待測(cè)。或直接稱(chēng)取0.1g酶制品，加入1mL提取液，置冰上待測(cè)。
二、測(cè)定步驟

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至680nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑一、試劑二和試劑三置于40℃水浴保溫30min以上。

3. 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：臨用前將20μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液用蒸餾水稀釋80倍至0.25μmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)溶液使用，現(xiàn)用現(xiàn)配。

1. 樣本測(cè)定：(1.5mLEP管中分別加入下列試劑)

取200μL于微量玻璃比色皿/96孔板，于680nm測(cè)定光吸收，分別記為A對(duì)照管、A測(cè)定管、A空白管、A標(biāo)準(zhǔn)管。
并計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定管-A對(duì)照管、ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管?？瞻坠芎蜆?biāo)準(zhǔn)管只需做1-2次

注意事項(xiàng)：
若反應(yīng)較弱，（A測(cè)定管-A對(duì)照管）差值較小，可適當(dāng)延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間（20-30min），即第一步水浴時(shí)間，最后計(jì)算酶活時(shí)對(duì)公式進(jìn)行修改。
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