植物根系活力檢測試劑盒（萘胺法）說明書

可見分光光度法

注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。

貨號：BC5290

規(guī)格：50T/48S

產(chǎn)品內(nèi)容：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1、 試劑三：臨用前加入49.5 mL蒸餾水，充分混勻，現(xiàn)用現(xiàn)配。未用完的試劑2-8℃可以保存4周。

2、 標(biāo)準(zhǔn)品：0.2 mg/mL α-萘胺標(biāo)準(zhǔn)品。

產(chǎn)品說明：

根系是植物吸收水分和礦質(zhì)營養(yǎng)的主要器官，同時又是植物體中如氨基酸、激素等重要物質(zhì)合成、同化、轉(zhuǎn)化的器官，因此根的生長情況和活動能力直接影響植物個體的生長情況、營養(yǎng)水平和產(chǎn)量水平，測定根系活力具有重要的實際意義。

植物根系能氧化吸附在根表面的α-萘胺，生成紅色的α-羥基-1-萘胺，沉淀于有氧化力的根的表面，使這部分染成紅色。α-萘胺在酸性條件下于對氨基苯磺酸鈉和亞硝酸鹽作用生成紅色的偶氮染料。根系活力可以通過α-萘胺減少量來表示。

NO₂^-+Sodium P-aminobenzenesulfonate+α-Naphthylamine                       Azo Compounds（520nm）  

注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液器、濾紙、1mL玻璃比色皿和蒸餾水。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）

樣本的制備：將根部組織洗凈，去除根上的泥土，輕輕擦干，不要過分?jǐn)D壓破壞根系細(xì)胞。稱取0.5g于10mL EP 管中。

二、測定步驟

1、 可見分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至520nm，蒸餾水調(diào)零。

2、 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：將0.2mg/mL α-萘胺標(biāo)準(zhǔn)品用試劑一稀釋為0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125、0.0015625、0mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品（0mg/mL記為標(biāo)準(zhǔn)空白管）。

3、 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋表：

備注：下述實驗中每個標(biāo)準(zhǔn)管需400µL標(biāo)準(zhǔn)品（注意不要在此步驟直接檢測標(biāo)準(zhǔn)品吸光值）。

4、在10mL EP管按下表步驟加樣：

充分混勻，常溫反應(yīng)20min，取1mL于1mL玻璃比色皿中，測定在520nm處的吸光度，顯色后需要在20min內(nèi)完成檢測。10min所對應(yīng)的吸光值記作A1，3h10min所對應(yīng)的吸光值記作A2。計算?A測定=A1_測定-A2_測定，?A空白=A1_空白-A2_空白，?A =?A測定-?A空白，?A標(biāo)=A標(biāo)準(zhǔn)-A標(biāo)準(zhǔn)空白管。（標(biāo)準(zhǔn)曲線和空白管只需做1-2次）

三、根系活力計算

1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管的濃度（x，mg/mL）和吸光度ΔA標(biāo)（y，ΔA標(biāo)），建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，將ΔA（y，?A）帶入公式計算樣本濃度（x，mg/mL）

2. 按照樣本質(zhì)量計算：以氧化的α-萘胺的量來表示根系活力

根系活力[ μg / (g·h) ]=x×V試劑二×10³÷(W×T)=1666.67×x÷W

10³：單位換算，1mg/mL=10³μg /mL；V試劑二：試劑二的體積，5mL；W：根系質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時間，3h。

注意事項：

1、 在EP管內(nèi)加入試劑三、試劑四以及樣本的順序不可改變。

2、 果?A結(jié)果不在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)，可以減少樣本質(zhì)量（或者減少第一步反應(yīng)時間）或者增加樣本質(zhì)量（或者增加第一步反應(yīng)時間）。

3、 顯色后需要在20min內(nèi)完成檢測

實驗實例：

1、 稱取0.5011g豆芽的根部，洗凈，擦干，按照測定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測得計算?A測定=A1_測定-A2_測定=1.182-1.06=0.122，?A空白=A1_空白-A2_空白=1.217-1.175=0.042，?A =?A測定-?A空白=0.122-0.042=0.080，標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=4.7754x+0.0047，計算得x=0.016mg/mL,帶入公式計算：

根系活力[ μg / (g·h) ] =1666.67×x÷W =53.216 μg / (g·h)

2、 稱取0.5007g景天的根部，洗凈，擦干，按照測定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測得計算?測定=A1_測定-A2_測定=1.171-1.012=0.159，?空白=A1_空白-A2_空白=1.217-1.175=0.042，?A =?A測定-?A空白=0.159-0.042=0.117，標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=4.7754x+0.0047，計算得x=0.023mg/mL,帶入公式計算：

根系活力[ μg / (g·h) ] = 1666.67×x÷W =76.560 μg / (g·h)

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