高鐵血紅蛋白（MetHb）含量檢測試劑盒說明書

可見分光光度法

貨號：BC5600

規(guī)格：50T/48S

產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 標準品：臨用前加入1mL蒸餾水充分溶解，即為10mg/mL血紅蛋白標準品，2-8℃可保存4周。

2. 0.625 mg/mL標準品配制：取50μL 10mg/mL血紅蛋白標準品，加入750μL蒸餾水，充分混勻，配制成0.625mg/mL的血紅蛋白標準品使用，現(xiàn)配現(xiàn)用。

產(chǎn)品說明：

高鐵血紅蛋白（Methemoglobin，MetHb）為血紅蛋白的氧化物，是血紅蛋白分子內(nèi)的亞鐵離子被氧化成三價鐵離子形成的。血紅蛋白具有攜氧能力，氧化后的高鐵血紅蛋白失去攜氧能力，測定高鐵血紅蛋白含量可以衡量血液及紅細胞代用品攜氧能力，其測定方法對臨床診斷高鐵血紅蛋白血癥和研制紅細胞代用品具有重要意義。

血紅蛋白與氧結合形成氧合血紅蛋白，脫氧后為脫氧血紅蛋白，分別測定氧合血紅蛋白、脫氧血紅蛋白和高鐵血紅蛋白在560nm、576nm、630nm處的吸光值，利用各組分在特定波長的消光系數(shù)，可計算各組分的質(zhì)量濃度百分比，再測出樣本的總血紅蛋白含量，即可計算得到樣本的高鐵血紅蛋白含量。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計、低溫離心機、1mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、冰和蒸餾水。

操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件

注意事項：

1. 如果A總大于1.0，建議將樣本用蒸餾水稀釋后進行測定，計算公式中注意同步修改。

2. 如果A總小于0.01或接近空白管吸光值，可適當增大樣本量，空白管和標準管也需要進行相應調(diào)整。

實驗實例：

1. 將兔紅細胞，用蒸餾水稀釋100倍后測定總血紅蛋白含量，不稀釋直接測定A560、A576、A630，用1mL玻璃比色皿測得并計算ΔA總=A總-A空白=0.537-0.007 =0.530，ΔA標準= A標準-A空白=0.369-0.007=0.362；A560=0.741，A576=1.218，A630=0.104；計算：

（1）總血紅蛋白含量（mg/mL）= 0.625×ΔA總÷ΔA標準×F=91.51 mg/mL

（2）MetHb（%）=0.2380÷（0.2380+0.6509+0.0329）×100%=25.82%

（3）高鐵血紅蛋白含量（mg/mL）=總血紅蛋白含量×MetHb（%）=23.627mg/mL

2. 將兔全血，用蒸餾水稀釋160倍后測定總血紅蛋白含量，不稀釋直接測定A560、A576、A630，用1mL玻璃比色皿測得計算ΔA總=A總-A空白= 0.570-0.007 =0.563，ΔA標準= A標準-A空白=0.369-0.007=0.362；A560=1.111，A576=1.650，A630=0.072，計算：

（1）總血紅蛋白含量（mg/mL）= 0.625×ΔA總÷ΔA標準×F=155.525 mg/mL

（2）MetHb（%）=0.084÷（0.2402+0.8292+0.0840）×100%=7.283%

（3）高鐵血紅蛋白含量（mg/mL）=總血紅蛋白含量×MetHb（%）=11.33mg/mL

3. 將小鼠全血，用蒸餾水稀釋160倍后測定總血紅蛋白含量，不稀釋直接測定A560、A576、A630，用1mL玻璃比色皿測得并計算ΔA總=A總-A空白= 0.787-0.007=0.780，ΔA標準= A標準-A空白=0.369-0.007=0.362；A560=1.518，A576=1.821，A630=0.373，計算：

（1）總血紅蛋白含量（mg/mL）= 0.625×ΔA總÷ΔA標準×F=215.47 mg/mL

（2）MetHb（%）=0.8201÷（0.4564+0.5931+0.8201）×100%=43.86%

（3）高鐵血紅蛋白含量（mg/mL）=總血紅蛋白含量×MetHb（%）=95.51mg/mL

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