土壤堿性磷酸酶（S-AKP/ALP）活性檢測試劑盒說明書
微量法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC0285
規(guī)格：100T/96S
產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑二：臨用前加100 mL蒸餾水充分溶解，2-8℃保存8周；

2. 試劑四：臨用前取1支加576 μL無水乙醇（自備），24 μL蒸餾水充分溶解。用不完的試劑2-8℃保存一周（變褐色后不能再使用，一瓶即可以實驗100T，為延長反應(yīng)時間故多給一瓶）；

3. 標準品：0.5 μmol/mL*酚標準液。

產(chǎn)品說明：
土壤磷酸酶是一類催化土壤有機磷礦化的酶，其活性的高低直接影響著土壤中有機磷的分解轉(zhuǎn)化及其生物有效性，是評價土壤磷素生物轉(zhuǎn)化方向與強度的指標。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH顯著影響，根據(jù)最適pH范圍，通常分為酸性、中性和堿性三種類型。

堿性環(huán)境中，S-AKP/ALP催化磷酸苯二鈉水解生成*酚和磷酸*二鈉，通過測定酚的生成量即可計算出S-AKP/ALP活性。
 

注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96孔板、臺式離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、分析天平、可調(diào)式移液器、冰、研缽、蒸餾水、30-50目篩、乙醇和甲苯（不允許快遞）。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
1. 新鮮土樣自然風(fēng)干或37℃烘箱風(fēng)干，過30~50目篩。
2. 稱取風(fēng)干混勻土壤約0.1g，加入0.05mL甲苯（自備），輕搖15min；加0.4mL試劑一并且搖勻后，置于37℃水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱，開始計時，催化反應(yīng)24h；到時后迅速加入1mL試劑二充分混勻，以終止酶催化的反應(yīng)。

10000rpm室溫離心10min，取上清液置于冰上待測。
二、測定步驟

1. 分光光度計/酶標儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長到660nm，分光光度計蒸餾水調(diào)零。

2. 空白管：取微量比色皿/96孔板，加入10μL試劑一，20μL試劑三，4μL試劑四，充分混勻，顯色后再加蒸餾水166μL，混勻后室溫靜置30min，于660nm測定吸光度，記為A空白管。（空白管只需要測定1-2次）

3. 標準管：取微量比色皿/96孔板，加入10μL標準液，20μL試劑三，4μL試劑四，充分混勻，顯色后再加蒸餾水166μL，混勻后室溫靜置30min，于660nm測定吸光度，記為A標準管。（標準管只需要測定1-2次）

4. 測定管：取微量比色皿/96孔板，加入10μL上清液，20μL試劑三，4μL試劑四，充分混勻，顯色后再加蒸餾水166μL，混勻后室溫靜置30min，于660nm測定吸光度，記為A測定管。

三、S-AKP/ALP活性計算
活性單位定義：37℃中每克土壤每天釋放1nmol酚為1個酶活單位。
S-AKP/ALP活性（U/g 土樣）=[C標準液×(A測定管-A空白管)÷(A標準管-A空白管)]×V總÷W÷T×1000
=725×(A測定管-A空白管)÷(A標準管-A空白管)÷W
C標準液：0.5μmol/mL；V總：催化體系總體積，1.45mL；W：土壤樣本質(zhì)量，g；T：催化反應(yīng)時間，24 h=1d；1000：單位換算系數(shù)，1μmol=1000nmol。
相關(guān)發(fā)表文獻：

1. Liu B, Wang S, Wang J, et al. The great potential for phytoremediation of abandoned tailings pond using ectomycorrhizal Pinus sylvestris[J]. Science of The Total Environment, 2020, 719: 137475.

2. Shao T, Zhao J J, Liu A, et al. Effects of soil physicochemical properties on microbial communities in different ecological niches in coastal area[J]. Applied Soil Ecology, 2020: 103486.

參考文獻：

1. Guan S. Soil Enzyme and Its Research Method [M]. Beijing: Science Press, 1982.

相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC0120/BC0125 土壤脲酶（S-UE）活性檢測試劑盒
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