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      • 高鐵螯合物還原酶活性檢測試劑盒 微量法
      產(chǎn)品名稱:

      高鐵螯合物還原酶活性檢測試劑盒 微量法

      產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
      廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-04-23
      單位

      中文名稱
      高鐵螯合物還原酶活性檢測試劑盒 微量法
      有效期
      6個月
      儲存條件
      2-8℃
      英文名稱
      Ferric chelate reductase Activity Assay Kit
      檢測方法
      微量法
      規(guī)格
      100T/96S
      自備試劑
      該試劑盒實驗過程中需自備試劑,詳情見網(wǎng)站說明書

      產(chǎn)品概述

      品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
      分子式詳詢純度詳詢
      分子量詳詢貨號BC5915
      規(guī)格100T/96S供貨周期現(xiàn)貨
      主要用途高鐵螯合物還原酶活性檢測應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

      高鐵螯合物還原酶(FCR)活性檢測試劑盒說明書

      微量法

      貨號:BC5915

      規(guī)格:100T/96S

      產(chǎn)品組成:使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

      試劑名稱

      規(guī)格

      保存條件

      提取液

      液體110 mL×1瓶

      2-8℃保存

      試劑一

      液體6 mL×1瓶

      2-8℃保存

      試劑二

      液體10 mL×1瓶

      2-8℃保存

      試劑三

      液體6 mL×1瓶

      2-8℃保存

      標準品

      粉劑×1

      2-8℃保存

      溶液的配制:

      1、 顯色液:臨用前根據(jù)樣本數(shù)量按照試劑一:試劑二:試劑三=50μL:50μL50μL150μL,1T)的比例配制顯色液,充分混勻,現(xiàn)配現(xiàn)用。

      2、 標準品:臨用前加入0.71mL蒸餾水和10μL濃硫酸,配制成50μmol/mL Fe2+標準液。溶解好的標準品2-8℃可以保存2周。

      3、 62.5nmol/mL標準溶液的配制:臨用前取50μL 50μmol/mL Fe2+標準液和950μL蒸餾水混合配制成2.5μmol/mL 標準溶液;再吸取25μL 2.5μmol/mL2500nmol/mL)和975μL蒸餾水混合配制成62.5nmol/mL標準溶液備用。

      產(chǎn)品說明:

      雙子葉植物和非禾本科單子葉植物采用鐵螯合還原反應(yīng)的高效活化和吸收機制從土壤中獲取鐵。三價鐵還原為二價鐵后才能被植物吸收利用。在鐵充足時,植物根部的三價鐵氧化還原酶將Fe(III)-螯合物中的鐵還原并將還原所得Fe2+轉(zhuǎn)運通過細胞質(zhì)膜進入根細胞內(nèi)。高鐵螯合物還原酶(Ferric chelate reductase,FCREC1.16.1.7)催化Fe3+還原為Fe2+,F(xiàn)e2+和菲洛嗪形成紫色絡(luò)合物,在562nm下有特征吸收峰。

      注意:實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

      需自備的儀器和用品:

      可見分光光度計/酶標儀、低溫離心機、分析天平、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器、濃硫酸(95%-99% AR)、冰和蒸餾水。

      操作步驟:

      一、樣本處理(可適當調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)

      1. 組織樣本:按質(zhì)量(g): 提取液體積(mL1 : 5~10比例加入提取液(建議稱取0.1g樣本,加入1.0mL提取液),冰浴勻漿后,于4℃,8000g,離心10min,棄沉淀,取上清液置于冰上待測。


      2. 液體樣本:直接測定。若液體有渾濁則離心取上清測定。

      二、測定步驟

      1.可見分光光度計/酶標儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至562nm,可見分光光度計用蒸餾水調(diào)零。

      2.顯色液臨用前平衡至常溫。

      3.標準管測定

      吸取50μL 62.5nmol/mL Fe2+標準液,加入150μL顯色劑,充分混勻,測定562nm下的吸光度,記為A標準,此時Fe2+終濃度為15.625nmol/mL,標準管只需做1-2次。

      4.空白管測定

      吸取50μL蒸餾水,加入150μL顯色劑,充分混勻,測定562nm下的吸光度,記為A空白,計算ΔA標準=A標準-A空白,空白管只需做1-2次。

      5.操作表:(在微量玻璃比色皿或96孔板中以下試劑)

      試劑名稱(μL

      測定管

      樣本

      50

      顯色液

      150

      立即充分混勻后于微量玻璃比色皿/96孔板,562nm處測定10s時的吸光值A1,常溫反應(yīng)30min,測定30min10s時的吸光值A2,記錄562nm10s時吸光值A130min后的吸光值A2。計算ΔA=A2-A1。

      三、高鐵螯合物還原酶(FCR)活性計算

      (1)按樣本蛋白濃度計算:

      單位的定義:每mg組織蛋白在每mL體系中每分鐘生成1nmol Fe2+定義為一個酶活力單位。

      FCR活性(U/mg prot)= ΔA×C÷ΔA標準×V÷(Cpr×V) ÷T=2.083×ΔA÷ΔA標準÷Cpr

      (2)按樣本質(zhì)量計算:

      單位的定義:每g組織在每mL體系中每分鐘生成1nmol Fe2+定義為一個酶活力單位。

      FCR活性(U/g 質(zhì)量) =ΔA×C÷ΔA標準×V反總÷(W÷V提取×V) ÷T =2.083×ΔA÷ΔA標準÷W

      C標:Fe2+標準液最終濃度,15.625nmol/mL;V反總:反應(yīng)體系總體積,0.2mL;Cpr:上清液蛋白濃度,mg/mL;V 樣:加入反應(yīng)體系中上清液體積,50μL=0.05mL;V提?。杭尤胩崛∫后w積,1mL; T:反應(yīng)時間,30minW:樣本質(zhì)量,g。

      注意事項:

      1、 如果?A小于0.010或測定管吸光值接近空白管,可以增加樣本量或者延長反應(yīng)時間后再進行測定;如果?A大于1或者A1大于1,建議將樣本上清用提取液適當稀釋后再進行測定。注意同步修改計算公式。

      實驗實例:

      1、 稱取0.1214g櫻桃番茄,加入提取液進行冰浴勻漿,按照測定步驟操作,用96孔板測得計算ΔA= A2-A1=0.665-0.127=0.538,ΔA標準=A標準-A空白=0.525-0.083=0.442,帶入公式計算:

      FCR活性(U/g 質(zhì)量) =2.083×ΔA÷ΔA標準÷W=20.885 U/g 質(zhì)量

      2、 稱取0.1002g閩南葉片,加入提取液進行冰浴勻漿,按照測定步驟操作,用96孔板測得計算ΔA= A2-A1=0.188-0.104=0.084,ΔA標準=A標準-A空白=0.525-0.083=0.442,帶入公式計算:

      FCR活性(U/g 質(zhì)量) =2.083×ΔA÷ΔA標準÷W=3.951U/g 質(zhì)量

      參考文獻:

      [1] Shabnam N , Kim M , Kim H .Iron (Ⅲ) oxide nanoparticles alleviate arsenic induced stunting in Vigna radiata[J].Ecotoxicology and Environmental Safety, 2019, 183(Nov.).

      [2 Kabir A H , Akther M S , Skalicky M ,et al.Downregulation of Zn-transporters along with Fe and redox imbalance causes growth and photosynthetic disturbance in Zn-deficient tomato[J].Scientific Reports, 2021, 11(1).

      [3] Ojeda M , Schaffer B , Davies F S .Root and Leaf Ferric Chelate Reductase Activity in Pond Apple and

      Soursop[J].Journal of Plant Nutrition, 2005, 27(8):1381-1393.

      相關(guān)系列產(chǎn)品:

      BC4340/BC4345 亞鐵氧化酶(HP)活性檢測試劑盒

      BC4350/BC4355 組織鐵含量檢測試劑盒

      BC5410/BC5415 亞鐵離子含量檢測試劑盒


      高鐵螯合物還原酶活性檢測試劑盒 微量法 高鐵螯合物還原酶活性檢測試劑盒 微量法


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