植物硝態(tài)氮含量檢測試劑盒說明書

可見分光光度法

貨號：BC1500

規(guī)格：50T/24S

產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1、 試劑一：臨用前根據(jù)用量每瓶加入2 mL濃硫酸充分溶解；配制好后盡快使用，2-8℃可保存一周。

2、 標準品：10 mg硝酸鉀，臨用前加入0.935 mL 蒸餾水溶解，配成1400 μg/mL的NO₃-N標準液。

產(chǎn)品說明：

硝酸鹽是植物吸收的主要含氮物質(zhì)之一。硝酸鹽在植物體內(nèi)的還原部位不同，可以在根內(nèi)，也可以在枝葉內(nèi)進行，且因植物類別和環(huán)境條件而異。因此，測定植物體內(nèi)硝態(tài)氮含量變化對了解氮代謝機制有重要的意義。

在濃酸條件下，NO₃^-可以與水楊酸反應，生成硝基水楊酸，后者在PH>12的條件下呈黃色，在一定范圍內(nèi)，其顏色深淺與含量成正比，可比色測定計算硝態(tài)氮含量。

技術指標：

低檢出限：0.7534 μg/mL

線性范圍：0.875-84 μg/mL

注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、1mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、濃硫酸、冰和蒸餾水。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）

按照質(zhì)量（g）：蒸餾水體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g樣本，加入1mL蒸餾水）加入蒸餾水，室溫勻漿后置于90℃恒溫水浴鍋中浸提30min，期間不斷晃動或者置于90℃恒溫搖床中振蕩提取30min，待冷卻后于25℃，12000g離心15min，取上清待測。

二、測定步驟

1. 分光光度計預熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至410nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 將1400μg/mL NO₃-N標準液用蒸餾水50倍稀釋成28μg/mL的標準溶液。

3. 操作表：

三、植物NO₃-N的計算

1. 按樣本質(zhì)量計算

NO₃- N含量（μg/g 質(zhì)量）=ΔA÷（ΔA標準÷C標準）×V提取÷W=28×ΔA÷ΔA標準÷W

2. 按樣本蛋白濃度計算

NO₃- N含量（μg/mg prot）=ΔA÷（ΔA標準÷C標準）×V提取÷（Cpr×V提取）=28×ΔA÷ΔA標準÷Cpr

W：樣本質(zhì)量，g；C標準：標準溶液濃度，28μg/mL；V提?。?/span>樣本總體積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL。

注意事項：

1．試劑一和試劑二均具有強腐蝕性，操作時需做好防護措施。

2．如果樣本吸光值大于1.4，建議將樣本用蒸餾水稀釋后進行測定。

實驗實例：

1、 取0.1g蘋果加入1mL蒸餾水進行樣本處理，取上清后按照測定步驟操作，測得計算ΔA=A測定管-A對照管=0.560-0.002=0.558，ΔA標準管=A標準管-A空白管=0.563-0.01=0.553，按樣本質(zhì)量計算含量得：

NO₃-N含量（μg/g質(zhì)量）=28×ΔA÷ΔA標準÷W=28×0.558÷0.553÷0.1=282.5 μg/g質(zhì)量。

2、 取0.1g葉片加入1mL蒸餾水進行樣本處理，取上清后按照測定步驟操作，測得計算ΔA=A測定管-A對照管=0.907-0.645=0.262，ΔA標準管=A標準管-A空白管=0.563-0.01=0.553，按樣本質(zhì)量計算含量得：

NO₃-N含量（μg/g質(zhì)量）=28×ΔA÷ΔA標準÷W=28×0.262÷0.553÷0.1=132.7 μg/g質(zhì)量。

相關發(fā)表文獻：

[1] Fuyuan Zhu,Moxian Chen,Wailung Chan,et al. SWATH-MS quantitative proteomic investigation of nitrogen starvation in Arabidopsis reveals new aspects of plant nitrogen stress responses. Journal of Proteomics. September 2018;(IF3.537)

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