苯BING氨酸解氨酶（PAL）活性檢測試劑盒說明書

紫外分光光度法

貨號：BC0210

規(guī)格：50T/48S

產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1、 試劑二：臨用前取1瓶加入4 mL蒸餾水充分溶解待用；現(xiàn)配現(xiàn)用。2-8℃可以保存2周。

產(chǎn)品簡介：

PAL（EC4. 3 1 5）廣泛存在于各種植物和少數(shù)微生物中，是植物體內(nèi)苯丙烷類代謝的關(guān)鍵酶，與一些重要的次生物質(zhì)如木質(zhì)素、異黃酮類植保素、黃酮類色素等合成密切相關(guān)，在植物正常生長發(fā)育和抵御病菌侵害過程中起重要作用。PAL催化L-苯BING氨酸裂解為反式肉桂酸和氨，反式肉桂酸在290nm處有最大吸收值，通過測定吸光值升高速率計(jì)算PAL活性。

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。

需自備的儀器和用品：

紫外分光光度計(jì)、水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）

稱取約0.1g組織，加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿。10000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

二、測定步驟

1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至290nm，蒸餾水調(diào)零。

2、操作表

混勻，靜置10min后，在290nm處記錄測定管吸光值A1和空白管吸光值A2，ΔA=A1-A2。（空白管只需做1-2次）

三、PAL活性計(jì)算

（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：

單位的定義：每mg組織蛋白在每mL反應(yīng)體系中每分鐘使290nm下吸光值變化0.1定義為一個酶活力單位。

PAL（U/mg prot）=ΔA×V反總÷0.1÷（Cpr×V樣）÷T =17.3×ΔA ÷Cpr

（2）按樣本質(zhì)量計(jì)算：

單位的定義：每g組織在每mL反應(yīng)體系中每分鐘使290nm下吸光值變化0.1定義為一個酶活力單位。

PAL（U/g 質(zhì)量）=ΔA×V反總÷0.1÷（V樣÷V提取×W）÷T =17.3×ΔA ÷W

V樣：加入樣本體積，20µL=0.02mL；V反總：反應(yīng)總體積，1.040mL；V提?。杭尤胩崛∫旱捏w積，1mL；T：反應(yīng)時間，30min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g。

相關(guān)發(fā)表文獻(xiàn)：

[1] Li B, Ding Y, Tang X, et al. Effect of L-Arginine on Maintaining Storage Quality of the White Button Mushroom (Agaricus bisporus) [J]. Food and Bioprocess Technology, 2019, 12(4): 563-574.

[2] Zhang J, Lv J, Xie J, et al. Nitrogen Source Affects the Composition of Metabolites in Pepper (Capsicum annuum L.) and Regulates the Synthesis of Capsaicinoids through the GOGAT–GS Pathway[J]. Foods, 2020, 9(2): 150.

參考文獻(xiàn)：

[1] Ayda? S B, Ozturk S, Asl?m B. Phenylalanine ammonia lyase (PAL) enzyme activity and antioxidant properties of some cyanobacteria isolates[J]. Food chemistry, 2013, 136(1): 164-169.

[2] Rosler J, Krekel F, Amrhein N, et al. Maize phenylalanine ammonia-lyase has tyrosine ammonia-lyase activity[J]. Plant physiology, 1997, 113(1): 175-179.

[3] Cheng G W, Breen P J. Activity of phenylalanine ammonia-lyase (PAL) and concentrations of anthocyanins and phenolics in developing strawberry fruit[J]. Journal of the American Society for Horticultural Science, 1991, 116(5): 865-869.

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