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品牌	SOLARBIO/索萊寶	CAS	詳詢
分子式	詳詢	純度	詳詢
分子量	詳詢	貨號	BC4180
規(guī)格	50T/48S	供貨周期	現(xiàn)貨
主要用途	莽草酸脫氫酶(SD)活性檢測	應用領(lǐng)域	環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

莽草酸脫氫酶（SD）活性檢測試劑盒說明書
紫外分光光度法
貨號: BC4180
規(guī)格: 50T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱	規(guī)格	保存條件
提取液	液體60 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑一	液體20 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑二	粉劑×1瓶	2-8℃保存
試劑三	粉劑×2瓶	-20℃保存

溶液的配制：

提取液：內(nèi)含不溶物，用前搖勻。
試劑二：臨用前加入10 mL蒸餾水溶解。
試劑三：臨用前每瓶加入11 mL蒸餾水溶解。
工作液的配制：根據(jù)用量按照試劑一：試劑二：試劑三為7:4:8的體積比例充分混勻，現(xiàn)用現(xiàn)配，用前25℃預熱15min。

產(chǎn)品說明：
莽草酸途徑是存在于植物和微生物中的一條重要的代謝途徑，莽草酸脫氫酶(EC 1.1.1.25) 是莽草酸合成代謝途徑中催化第四步反應的關(guān)鍵酶。
莽草酸脫氫酶催化莽草酸和NADP產(chǎn)生NADPH，檢測340nm下的吸光值增加速率來表示SD活性。
Shikimic Acid +NADP NADPH(340nm)
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、1mL石英比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
1、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液（加入前搖勻））進行冰浴勻漿，然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。
2、細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細胞數(shù)量（10⁴個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。
3、液體：直接檢測。
二、測定步驟具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件

紫外分光光度計預熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至340nm，蒸餾水調(diào)零。
工作液25℃預熱10min以上。
操作表：在1mL石英比色皿中分別加入下列試劑：

試劑名稱	空白管	測定管
工作液（µL）	950	950
樣本（µL）	-	50
蒸餾水（µL）	50	-
加入樣本即開始計時，充分混勻后于340nm處測定20s時的吸光值A1和5min20s時的吸光值A2，計算ΔA測定管=A2測定-A1測定，ΔA空白管=A2空白-A1空白，ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管（空白管只需做1-2次）。

注意事項：

樣本提取上清液置于冰上待測，且樣本提取完成后建議2h內(nèi)測完。
樣本的蛋白濃度需自行測定，由于提取液中含有一定濃度的蛋白（約1mg/mL），所以測定樣本蛋白濃度時需扣除提取液自身蛋白濃度。
ΔA大于1時，建議將樣本稀釋后再進行測定。當ΔA小于0.01時，可以延長反應時間（10min或15min）來測定。
空白管為檢測各試劑組分質(zhì)量的檢測孔，正常情況下，變化不超過0.01。

實驗實例：

取0.1g蘿卜葉，加入1mL提取液，進行樣本處理，取上清按照測得步驟操作，測得計算ΔA測定管=A2測定-A1測定=1.441-1.201=0.24，ΔA空白管=A2空白-A1空白=0，ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管=0.24，按照樣本質(zhì)量計算得：SD酶活（U/g 質(zhì)量）=643×ΔA÷W=1543.2 U/g 質(zhì)量。

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