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      • 木質(zhì)素過(guò)氧化物酶活性檢測(cè)試劑盒 其他系列
      產(chǎn)品名稱(chēng):

      木質(zhì)素過(guò)氧化物酶活性檢測(cè)試劑盒 其他系列

      產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價(jià)格:
      廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時(shí)間: 2025-04-21
      木質(zhì)素過(guò)氧化物酶活性檢測(cè)試劑盒 其他系列
      儲(chǔ)存條件
      2-8℃
      有效期
      6個(gè)月
      單位

      英文名稱(chēng)
      Lignin peroxidase (Lip) Activity Assay Kit
      檢測(cè)方法
      紫外分光光度法 Spectrophotometer
      規(guī)格
      50T/48S

      產(chǎn)品概述

      品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
      分子式詳詢純度詳詢
      分子量詳詢貨號(hào)BC1610
      規(guī)格50T/48S供貨周期現(xiàn)貨
      主要用途木質(zhì)素過(guò)氧化物酶活性檢測(cè)應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

      木質(zhì)素過(guò)氧化物酶(Lip)活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

      紫外分光光度法

      注意:本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng),請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說(shuō)明書(shū)操作。

      貨號(hào):BC1610

      規(guī)格:50T/48S

      產(chǎn)品內(nèi)容:使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

      試劑名稱(chēng)

      規(guī)格

      保存條件

      試劑一

      液體85mL×1

      2-8℃保存

      試劑二

      液體11mL×1

      2-8℃保存

      試劑三

      液體6mL×1

      2-8℃保存

      產(chǎn)品說(shuō)明:

      木質(zhì)素過(guò)氧化物酶(EC1.11.1.14)(Lip)是一種含亞鐵血紅素的過(guò)氧化物酶,是木質(zhì)素的生物降解過(guò)程中的主要木質(zhì)素降解酶類(lèi)。Lip在飼料資源開(kāi)發(fā)以及廢水、廢物處理領(lǐng)域有著廣闊的應(yīng)用前景。藜蘆醇可以被Lip催化發(fā)生氧化反應(yīng),其產(chǎn)物藜蘆醛在310nm處有最大吸收峰,以藜蘆醇為反應(yīng)底物,通過(guò)測(cè)定310nm處藜蘆醛的吸光值,可以判定Lip的酶活性。


      注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

      需自備的儀器和用品:

      紫外分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液器、超聲波細(xì)胞破碎儀、研缽/勻漿器、1mL石英比色皿、冰和蒸餾水。

      操作步驟:

      一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))

      1、組織:按照樣本質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10 的比例(建議稱(chēng)取約0.1g組織,加入1mL試劑一)加入試劑一,冰浴勻漿;10000g 4℃離心10min,取上清置冰上待測(cè)。

      2細(xì)菌或細(xì)胞樣本:收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):試劑一體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 試劑一)加入試劑一,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率300W,超聲 3s,間隔 7s,總時(shí)間3min),10000g 4℃離心10min,取上清置冰上待測(cè)。

      3、培養(yǎng)液其他液體:直接檢測(cè)。若溶液渾濁則離心后取上清進(jìn)行測(cè)定。

      二、測(cè)定步驟

      1、可見(jiàn)分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至310nm,蒸餾水調(diào)零。

      2、測(cè)定前根據(jù)實(shí)驗(yàn)用量取出部分試劑一、試劑二、試劑三置于37℃預(yù)熱10min以上。若一次性測(cè)定樣本過(guò)多,可根據(jù)使用量將試劑一、二、三按6:2:1比例配成工作液后進(jìn)行預(yù)熱,測(cè)定時(shí)按照100μL樣本+900μL工作液加入1mL石英比色皿進(jìn)行測(cè)定。

      3、加樣表(在 1mL石英比色皿中依次加入下列試劑)


      試劑名稱(chēng)(μL

      測(cè)定管

      試劑一(μL

      600

      試劑二(μL

      200

      樣本μL

      100

      試劑μL

      100

          將上述試劑分別加入1mL石英比色皿后迅速吹打混勻,從加完最后一個(gè)試劑開(kāi)始計(jì)時(shí),記錄第15s的吸光值A1,將混合液置于37水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)5min,取出測(cè)定5min15s時(shí)的吸光值A2,計(jì)算ΔA=A2-A1,注意保證測(cè)定時(shí)間的準(zhǔn)確性。

      三、Lip活力的計(jì)算

      1.按樣本蛋白質(zhì)濃度計(jì)算

      酶活定義:37,pH4.5條件下,每mg組織蛋白每分鐘氧化1nmol藜蘆醇所需的酶量為一個(gè)酶活單位。

      Lip活性(U/mg prot= ΔA×V反總÷(?×d)×109÷(V×Cpr)÷T=215.05×ΔA÷Cpr

      2.按樣本質(zhì)量計(jì)算

      酶活定義:37,pH4.5條件下,每g組織每分鐘氧化1nmol藜蘆醇所需的酶量為一個(gè)酶活單位。

      Lip活性(U/g 質(zhì)量)= ΔA×V反總÷(?×d)×109÷(V÷V樣總×W)÷T=215.05×ΔA÷W

      3.按細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

      酶活定義:37,pH4.5條件下,每104細(xì)菌/細(xì)胞每分鐘氧化1nmol藜蘆醇所需的酶量為一個(gè)酶活單位。

      Lip活性(U/104 cell= ΔA×V反總÷(?×d)×109÷(V÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量)÷T=215.05×ΔA÷細(xì)胞數(shù)量

      4、 按照樣本體積計(jì)算

      酶活定義:37,pH4.5條件下,每mL血清或液體樣本每分鐘氧化1nmol藜蘆醇所需酶量為一個(gè)酶活單位。

      Lip活性(U/mL=ΔA×V反總÷(?×d)×109÷V÷T=215.05×ΔA

      ε藜蘆醛摩爾消光系數(shù):9300L/mol/cm;d:比色皿光徑,1cm;V反總:反應(yīng)總體積,0.001L;V樣:加入樣本體積,0.1mL,V樣總:提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,gT:反應(yīng)時(shí)間,5 min;109:?jiǎn)挝粨Q算系數(shù),1mol=109nmol。

      實(shí)驗(yàn)實(shí)例:

      0.09g杏鮑菇加入1mL試劑一進(jìn)行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min,取上清置冰上,之后按照測(cè)定步驟操作,測(cè)得計(jì)算A1=0.228A2=0.55,ΔA=A2-A1=0.322,按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得

      Lip活性(U/g 質(zhì)量=ΔA×V反總÷(?×d)×109÷V÷T=672.95U/g 質(zhì)量。

      參考文獻(xiàn):

      [1] Konadu K T, Harrison S, Osseo-Asare K. et al. Transformation of the carbonaceous matter in double refractory gold ore by crude lignin peroxidase released from the white-rot fungus[J]. International Biodeterioration & Biodegradation, 2019, 143(1996):104735.

      [2] Ahmed A A Q, Mckay T J M. Potential of Bacillus sp. LG7 as a Promising Source of Ligninolytic Enzymes for Industrial and Biotechnological Applications[J]. Proceedings of the National Academy of ences India, 2017.

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