植物脫氫酶（PDHA）活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
可見(jiàn)分光光度法
貨號(hào): BC3120
規(guī)格: 50T/24S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑一：使用前加少量水溶解，定容至30 mL，避光、4℃保存（盡量現(xiàn)配現(xiàn)用）；

2. 試劑三：自備乙酸乙酯。提供一60mL棕色試劑瓶。

產(chǎn)品說(shuō)明：
生物體的脫氫酶(Plant dehydrogenase , PDHA)的活性在很大程度上反映了生物體的活性狀態(tài)，能直接表示生物細(xì)胞對(duì)其基質(zhì)降解能力的強(qiáng)弱。
受氫體2,3,5-氯化三苯基四氮唑（2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride，即TTC）在細(xì)胞呼吸過(guò)程中接受氫以后，其還原產(chǎn)物三苯基甲替（Triphenyl Formazone，即TFF）呈現(xiàn)紅色，在波長(zhǎng)485nm處有最大吸收峰，采用分光光度法于485nm測(cè)定其吸光值，即得植物脫氫酶活性。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
臺(tái)式離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)、水浴鍋、1mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、冰、研缽/勻漿器、蒸餾水、乙酸乙酯（不允許快遞，請(qǐng)用戶自備）。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
稱取0.1g的植物組織，用雙蒸水清洗3-4次，用濾紙吸干水分，備用。
二、測(cè)定步驟

1. 可見(jiàn)分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至485nm，乙酸乙酯調(diào)零。

2. 操作表：取5mLEP管依次加入

三、脫氫酶活力計(jì)算
酶活單位定義：在37℃時(shí)，每小時(shí)每克組織樣本使反應(yīng)體系吸光值每增加0.01為一個(gè)酶活單位。
脫氫酶活性（U/g/h）=ΔA÷0.01÷T÷W=33×ΔA÷W
T：反應(yīng)時(shí)間，3h；W：樣本質(zhì)量，g。
注意事項(xiàng)：

1. 配制好的試劑一避光保存于4℃，盡量在一周內(nèi)使用，若出現(xiàn)紅色，則不能使用。

2. 試劑三易揮發(fā)，有毒，為了您的健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服，戴口罩，戴乳膠手套操作。

3. 反應(yīng)完成后立即冰浴以終止反應(yīng)，并去除干凈殘留的反應(yīng)液。

4. 如果測(cè)定出來(lái)的吸光值較大，需把樣本適當(dāng)稀釋再進(jìn)行測(cè)定，注意計(jì)算公式乘以稀釋倍數(shù)。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1. 稱取1g蘆薈葉片，用雙蒸水清洗3-4次，用濾紙吸干水分，按照測(cè)定步驟進(jìn)行操作，測(cè)得計(jì)算ΔA=A測(cè)定-A對(duì)照=0.120-0.012=0.108，計(jì)算酶活得：

脫氫酶活性（U/g/h）=33×ΔA÷W=3.5964 U/g/h。
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