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      培養(yǎng)基的制備方法及基本原則

      發(fā)布日期: 2016-05-23
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      培養(yǎng)基一般都含有碳水化合物、含氮物質、無機鹽(包括微量元素)以及維生素和水等。供微生物、植物組織和動物組織生長和維持用的人工配制的養(yǎng)料。不用的培養(yǎng)基的成分不同,但是步驟卻大徑相同。
            培養(yǎng)基的制備方法
            1.配料
            配方換算→在容器中加入少量水(蒸餾水,自然水)→按照配方稱取各種藥品(依次加入)→加足所需水量(一藥一勺,取藥后立即蓋上瓶蓋)。
            2.溶解
            淀粉溶解:少量冷水調成糊狀
            加熱溶解,特別是加有瓊脂的培養(yǎng)基,一定要煮沸,瓊脂的熔解溫度95-97℃ ,且需要邊加熱邊攪拌以防止燒焦。
            3.調PH
            用1N的鹽酸或1N的 NaOH把培養(yǎng)基調節(jié)到所要求的值。
            4.過濾
            濾紙或棉花進行過濾。(有時可以省去)
            5.分裝
            一般培養(yǎng)基放在三角瓶或試管中滅菌使用。
            (1)三角瓶
            若作靜置培養(yǎng),則100ml培養(yǎng)基/250ml的三角瓶,多不能超過150ml培養(yǎng)基/250ml的三角瓶,否則滅菌時培養(yǎng)基沸騰容易污染棉塞,造成染菌;若作搖瓶培養(yǎng),則15-20ml培養(yǎng)基/250ml的三角瓶,保證通氣良好。
            (2)試管分裝
            液體培養(yǎng)基一般裝4-5ml,約試管的1/4高度;
            固體斜面培養(yǎng)基一般裝3-4ml,約試管的1/5高度。
            6.包扎
            分裝好后,塞上棉塞,在用牛皮紙將棉塞包裹好,防止滅菌時水份進入把棉塞弄濕。
            7.滅菌
            按配方上要求的溫度、壓力進行高壓蒸汽滅菌。如果滅菌的溫度太高,營養(yǎng)成分會被破壞,培養(yǎng)基中的糖、氨基酸會使培養(yǎng)基的顏色變深。
            8.擺斜面
            滅菌后需要擺斜面的試管要趁熱斜著擺放,使其凝固成為一個斜面,約占試管長度的1/2。
            9.貯存
            培養(yǎng)基在30℃下放置,無污染的即可使用。一般用牛皮紙包裹好存放于2-8℃冰箱中備用。
            培養(yǎng)基配置原則
            1、選擇適宜的營養(yǎng)物質
            所有微生物生長繁殖均需要培養(yǎng)基含有碳源、氮源、無機鹽、生長因子、水及能源,但由于微生物營養(yǎng)類型復雜,不同微生物對營養(yǎng)物質的需求是不一樣的,因此先要根據(jù)不同微生物的營養(yǎng)需求配制針對性強的培養(yǎng)基。
            2、營養(yǎng)物質濃度及配比合適
            培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質濃度合適時微生物才能生長良好,營養(yǎng)物質濃度過低時不能滿足微生物正常生長所需,濃度過高時則可能對微生物生長起抑制作用,例如高濃度糖類物質、無機鹽、重金屬離子等不僅不能維持和促進微生物的生長,反而起到抑菌或殺菌作用。另外,培養(yǎng)基中各營養(yǎng)物質之間的濃度配比也直接影響微生物的生長繁殖和(或)代謝產(chǎn)物的形成和積累,其中碳氮比(C/N)的影響較大。
            3、控制pH條件
            培養(yǎng)基的pH必須控制在一定的范圍內(nèi),以滿足不同類型微生物的生長繁殖或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物。各類微生物生長繁殖或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物的適pH條件各不相同,一般來講,細菌與放線菌適于在pH7-7.5范圍內(nèi)生長,酵母菌和霉菌通常在pH4.5-6范圍內(nèi)生長。值得注意的是,在微生物生長繁殖和代謝過程中,由于營養(yǎng)物質被分解利用和代謝產(chǎn)物的形成與積累,會導致培養(yǎng)基pH發(fā)生變化,若不對培養(yǎng)基pH條件進行控制,往往導致微生物生長速度下降或(和)代謝產(chǎn)物產(chǎn)量下降。因此,為了維持培養(yǎng)基pH的相對恒定,通常在培養(yǎng)基中加入pH緩沖劑,常用的緩沖劑是一氫和二氫磷酸鹽(如KH2PO4 和K2HPO4)組成的混合物。
            4、控制氧化還原電位(redox potential)
            不同類型微生物生長對氧化還原電位(F)的要求不一樣,一般好氧性微生物在F值為+0.1V以上時可正常生長,一般以+0.3一+0.4V為宜,厭氧性微生物只能在F值低于+0.1V條件下生長,兼性厭氧微生物在F值為+0.1V以上時進行好氧呼吸,在+0.1V以下時進行發(fā)酵。F值與氧分壓和pH有關,也受某些微生物代謝產(chǎn)物的影響。在pH相對穩(wěn)定的條件下,可通過增加通氣量(如振蕩培養(yǎng)、攪拌)提高培養(yǎng)基的氧分壓,或加入氧化劑,從而增加F值;在培養(yǎng)基中加入抗壞血酸、硫化氫、半胱氨酸、谷胱甘肽、二硫蘇糖醇等還原性物質可降低F值。
            5、原料來源的選擇
            在配制培養(yǎng)基時應盡量利用廉價且易于獲得的原料作為培養(yǎng)基成分,特別是在發(fā)酵工業(yè)中,培養(yǎng)基用量很大,利用低成本的原料更體現(xiàn)出其經(jīng)濟價值。
      滅菌處理
            要獲得微生物純培養(yǎng),必須避免雜菌污染,因此對所用器材及工作場所進行消毒與滅菌。對培養(yǎng)基而言,更是要進行嚴格的滅菌。對培養(yǎng)基一般采取高壓蒸汽滅菌,一般培養(yǎng)基用1.05kg/cm2,121.3℃條件下維持15-30min可達到滅菌目的。

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