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      elisa間接法原理及實驗步驟

      發(fā)布日期: 2015-07-14
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        ELISA實驗中文酶聯(lián)免疫吸附試驗??捎糜跍y定抗原,也可用于測定抗體。間接法是多種實驗方法中常用方法。elisa間接法原理為利用酶標記的抗抗體以檢測已與固相結合的受檢抗體,故稱為間接法。

      elisa間接法操作步驟如下:

        (1)將特異性抗原與固相載體連接,形成固相抗原:洗滌除去未結合的抗原及雜質(zhì)。

        (2)加稀釋的受檢血清:其中的特異抗體與抗原結合,形成固相抗原抗體復合物。經(jīng)洗滌后,固相載體上只留下特異性抗體。其他免疫球蛋白及血清中的雜質(zhì)由于不能與固相抗原結合,在洗滌過程中被洗去。

        (3)加酶標抗抗體:與固相復合物中的抗體結合,從而使該抗體間接地標記上酶。洗滌后,固相載體上的酶量就代表特異性抗體的量。例如欲測人對某種疾病的抗體,可用酶標羊抗人IgG抗體。

        (4)加底物顯色:顏色深度代表標本中受檢抗體的量。

        elisa間接法法只要更換不同的固相抗原,可以用一種酶標抗抗體檢測各種與抗原相應的抗體。

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