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大家好，小編又又又來了。今天是WB最后一步了，抗體孵育到顯影過程。
01
一抗孵育
◆ 封閉結(jié)束前20min準備和所需一抗數(shù)量相等的孵育盒，在孵育盒上用記號筆標注出抗體編號及所需稀釋比。按照規(guī)定的稀釋比例進行抗體稀釋。稀釋比例建議預(yù)實驗提前摸索或者根據(jù)抗體說明書上建議。
◆ 封閉時間結(jié)束之后，倒掉封閉液，將稀釋好的抗體加入到槽內(nèi)，將搖床放入4℃展示柜孵育過夜。
◆ 第二天將搖床搬出，平衡室溫搖15min，倒掉一抗工作液，加入5mL TBST潤洗膜一次，倒掉，加新的TBST洗膜5min，倒掉TBST，重復(fù)5次，此過程在搖床上進行。
02
二抗孵育
◆ 在洗膜的過程中稀釋二抗，確定好一抗的物種來源，選擇相應(yīng)的二抗進行稀釋，稀釋液為1xTBST。
◆ 洗膜結(jié)束，倒掉TBST，盡量使孵育盒內(nèi)無殘留液體。然后加入二抗稀釋液，孵育60min，此過程在搖床上進行。
◆ 二抗孵育60min后，加入5mL TBST洗膜，“SPEED”檔位調(diào)到50-60，洗膜5min，倒掉TBST，重復(fù)5次。
03
顯影
按照膜的大小，配置ECL發(fā)光液體積，將發(fā)光液放在PE手套上，充分混勻。將膜從孵育盒中夾出，用紙沾干，放入發(fā)光液中5秒后用紙沾干，放入成像儀中曝光成像。
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好了，關(guān)于WB實驗的小技巧和注意事項都講完了，大家對于WB是不是有了一些新的想法，索萊寶公司除了能夠提供相關(guān)試劑外，還提供技術(shù)服務(wù)呦，把您的蛋白或者細胞樣本交給我們，我們提供完整的實驗報告和所有原始曝光圖片，助力您高分文章的順利發(fā)表。
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